生物樣品常規(guī)超薄切片制備流程(一)細(xì)胞、細(xì)菌等樣品：
1.固定
1)搜集樣品，經(jīng)緩沖液沖刷后，向樣品中參加 2.5% 戊二醛緩沖固定液(電鏡純度)，4℃ 固定 2 小時(shí)以上;
2)緩沖液沖刷2到3次，每次5分鐘;
3) 向樣品中參加1%或2%四氧化鋨緩沖固定液進(jìn)行后固定, 室溫或4℃固定1-3小時(shí);
4)緩沖液沖刷2到3次，每次5分鐘;
2. 脫水
用30%——50%——70%——90%——95%——100%酒精對樣品進(jìn)行梯度脫水, 每步5到10分鐘;其間100%酒精需求重復(fù)2-3次，以確保脫水徹底;
3. 浸透
透射電鏡
用無水環(huán)氧丙烷或丙酮置換樣品中酒精，5-10分鐘;然后進(jìn)行環(huán)氧樹脂浸透。(依選用的環(huán)氧樹脂種類和配方，嚴(yán)厲按配方份額將樹脂與固化劑等混兼并充沛拌和。)每步份額與時(shí)刻分別為：
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 3:1，1-3小時(shí)(室溫)
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 1:1，1-3小時(shí)(室溫)
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 1:3，3小時(shí)-過夜(室溫)
環(huán)氧樹脂： 12-24小時(shí)(室溫)
4. 包埋與聚合
向環(huán)氧樹脂中按1.5%-2%份額參加催化劑并混勻后注入包埋模具或膠囊中, 再將樣品按所需的方位擺放在包埋模具或膠囊的樹脂中，然后放入烘箱中聚合。主張先經(jīng)35℃12小時(shí)，再經(jīng)45℃12小時(shí)，然后60℃24小時(shí)聚合。
5.切片(略)
6.染色(略)
(二)植物安排(葉片、莖、根等)、真菌：
1.固定
1)收集樣品，經(jīng)緩沖液沖刷后，將樣品放置入2.5% 戊二醛緩沖固定液(電鏡純度)中。植物安排需抽真空以使固定液充沛進(jìn)入細(xì)胞(肉眼可見葉片等沉入固定液中)，4℃固定過夜;
2)緩沖液沖刷2到3次，每次5分鐘;
3) 向樣品中參加1%或2%四氧化鋨緩沖固定液進(jìn)行后固定, 室溫或4℃固定3-4小時(shí);
4)緩沖液沖刷2到3次，每次5分鐘;
2. 脫水
用30%——50%——70%——90%——95%——100%酒精對樣品進(jìn)行梯度脫水, 每步20到30分鐘;其間100%酒精需求重復(fù)2-3次，以確保脫水徹底;
3. 浸透
用無水環(huán)氧丙烷或丙酮置換酒精，20-30分鐘;然后進(jìn)行樹脂浸透。(依選用的環(huán)氧樹脂種類和配方，嚴(yán)厲按配方份額將樹脂與固化劑等混兼并充沛拌和。)每步份額與時(shí)刻分別為：
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 3:1，3小時(shí)(室溫)
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 1:1，3小時(shí)(室溫)
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 1:3，3小時(shí)-過夜(室溫)
純環(huán)氧樹脂： 24-72小時(shí)(室溫)
以上各步都在旋轉(zhuǎn)混合儀上進(jìn)行搖晃旋轉(zhuǎn)，以加快浸透。
4. 包埋與聚合
向純環(huán)氧樹脂中按1.5%-2%份額參加催化劑并混勻后注入包埋模具或膠囊中, 再將樣品按所需的方位擺放在包埋模具或膠囊的樹脂中，然后放入烘箱中聚合。主張先經(jīng)35℃12小時(shí)，再經(jīng)45℃12小時(shí)，然后60℃24小時(shí)聚合。(Spurr樹脂需70℃24小時(shí)聚合)。
5.切片(略)
6.染色(略)
(三)活體動(dòng)物安排：
1.固定
1)對小鼠腦、心臟等安排，用 2.5% 戊二醛和 4% 多聚甲醛混合緩沖固定液對試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行灌流固定;對肝、肺等其他安排，可在腹腔中滴入上述混合固定液后選材;迅速取出試驗(yàn)安排，用手術(shù)剪或尖利的刀片快速切割為不大于1mm3的安排塊，投入2.5% 戊二醛緩沖固定(電鏡純度)中，4℃或室溫放置2小時(shí)以上;
2)緩沖液沖刷2到3次，每次5分鐘;
3) 樣品中投入1%或2%四氧化鋨緩沖固定液中進(jìn)行后固定, 室溫或4℃固定1-3小時(shí);
4)緩沖液沖刷2到3次，每次5分鐘;
2. 脫水
用30%——50%——70%——90%——95%——100%酒精對樣品進(jìn)行梯度脫水, 每步5到10分鐘;其間100%酒精需求重復(fù)2-3次，以確保脫水徹底;
3. 浸透
用無水環(huán)氧丙烷或丙酮置換酒精，5-10分鐘;然后進(jìn)行環(huán)氧樹脂浸透。(依選用的環(huán)氧樹脂種類和配方，嚴(yán)厲按配方份額將樹脂與固化劑等混兼并充沛拌和。)每步份額與時(shí)刻分別為：
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 3:1，1-3小時(shí)(室溫)
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 1:1，1-3小時(shí)(室溫)
環(huán)氧丙烷(丙酮)：環(huán)氧樹脂= 1:3，3小時(shí)-過夜(室溫)
純環(huán)氧樹脂： 12-24小時(shí)(室溫)
4. 包埋與聚合
向環(huán)氧樹脂中按1.5%-2%份額參加催化劑并混勻后注入包埋模具或膠囊中, 再將樣品按所需的方位擺放在包埋模具或膠囊的樹脂中，然后放入烘箱中聚合。主張先經(jīng)35℃12小時(shí)，再經(jīng)45℃12小時(shí)，然后60℃24小時(shí)聚合。
5.切片(略)
6.染色(略)


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